Зміст
Аналіз полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) - це лабораторна техніка. Метою ПЛР-тестування є пошук невеликої кількості ДНК у зразку за допомогою процесу, відомого як посилення. Під час ампліфікації ПЛР ДНК, що представляє інтерес, копіюється неодноразово, поки її не вистачить для аналізу та виявлення. Наприклад, ПЛР може бути використана для виявлення невеликої кількості ДНК з організмів, що викликають гонорею або хламідіоз, які є у зразку сечі.Як працює ПЛР?
Першим кроком ПЛР є створення ґрунтовки. Це короткі послідовності ДНК, які збігаються до кінців зразка ДНК, який ви намагаєтеся виявити. Вони є фокусом у пошуку, посиленні та виявленні певної частини ДНК. Ця частина ДНК може бути використана для ідентифікації збудника. Також його можна використовувати для виявлення генів стійкості до антибіотиків.
Після отримання праймерів наступним етапом ПЛР є нагрівання зразка так, щоб дволанцюжкова ДНК поділилася на дві одинарні ланцюги - це називається денатурація. Потім ґрунтовкипоєднуються із зразком ДНК. Після цього ДНК полімераза використовується для початку реплікації ДНК у місці праймера. Нарешті, ДНК нагрівають, щоб ще раз відокремити нитки. З цим весь процес ПЛР починається спочатку.
Кількість ДНК-сегмента, що представляє інтерес, присутній у зразку збільшується в геометричній прогресії з кожним циклом ПЛР. У першому циклі одна копія стає двома. Потім дві копії стають чотирма, потім стають вісьмома і т. Д. Цей експоненціальний ріст означає, що, як правило, для визначення того, чи є ДНК, про яку йде мова, потрібно лише від 20 до 40 циклів. (Якщо ДНК присутня, 20-40 циклів також достатньо, щоб забезпечити достатню пробу для аналізу).
Усі етапи ланцюгової реакції полімерази - денатурація ДНК, нанесення праймерів та подовження ДНК - відбуваються при різних температурах. Це означає, що після складання вихідної суміші етапами можна керувати за допомогою процесу, відомого як термоциклізм. Термоциклізм означає, що температура тримається на необхідних рівнях досить довго, щоб відбувся кожен крок. Таким чином, ПЛР є ефективним способом посилення кількості цільової ДНК. Насправді це можна зробити в одній пробірці, не потребуючи втручання людини.
Ланцюгова реакція полімерази представляла революцію в біологічній техніці, коли вона була вперше розроблена на початку 1980-х. Творець ПЛР Карі Малліс виграв Нобелівську премію з хімії за свою роботу в 1993 році.
Чому ПЛР є актуальною для тестування на ЗПСШ
Полімеразна ланцюгова реакція та подібні методи, такі як ланцюгова реакція лігази, виявляються все більш важливими для тестування на ЗПСШ, оскільки ці методи можуть безпосередньо ідентифікувати невеликі кількості вірусної ДНК або РНК у зразках. Визначення генетичного коду збудника не вимагає, щоб збудник був живим, на відміну від бактеріальної культури або вірусної культури. Також не потрібно, щоб зараження відбулося досить давно, щоб люди розробили виявлену реакцію антитіл (спосіб виявлення зараження методом ІФА.) Це означає, що методи ПЛР можуть іноді виявляти захворювання раніше, ніж інші тести. Навіть краще, ЗПСШ можна виявити, не вимагаючи настільки тривоги щодо збереження зразків або тестування точно в потрібний час.
Найкращі домашні тести на ЗПСШ